Кислотная протеаза

Применение и принцип

Эта кислая протеаза используется для определения протеолитической активности, выраженной в единицах гемоглобина на основе тирозина (HUT), препаратов, полученных из Aspergillus oryzae var и Aspergillus niger var, и ее можно использовать для определения активности других протеаз при pH 4,7. . Тест основан на 30-минутном ферментативном гидролизе субстрата гемоглобина при pH 4,7 и 40 °. Негидролизованный субстрат осаждают трихлоруксусной кислотой и удаляют фильтрованием. Количество солюбилизированного гемоглобина в фильтрате определяют спектрофотометрически.

Реагенты и растворы кислотной протеазы
Гемоглобин Используйте порошок субстрата гемоглобина (Sigma Chemical Co., Каталожный № H2625) или аналогичный высококачественный материал, полностью растворимый в воде.
Ацетатный буферный раствор Растворите 136 г ацетата натрия (NaC2H3O2 · 3H2O) в воде, достаточной для получения 500 мл. Смешайте 25,0 мл этого раствора с 50,0 мл 1 М уксусной кислоты, разбавьте водой до 1000 мл и перемешайте. PH этого раствора должен быть 4,7 ± 0,02.
Раствор субстрата Перенесите 4,0 г гемоглобина в стакан емкостью 250 мл, добавьте 100 мл воды и перемешайте в течение 10 минут до растворения. Погрузите электроды pH-метра в раствор и при непрерывном перемешивании доведите pH до 1,7, добавив 0,3 н. Соляную кислоту. Через 10 мин доведите pH до 4,7, добавив 0,5 М ацетата натрия. Перенести раствор в мерную колбу на 200 мл, довести до объема водой и перемешать. Этот раствор стабилен около 5 дней в холодильнике.
Раствор трихлоруксусной кислоты Растворите 140 г трихлоруксусной кислоты примерно в 750 мл воды. Перенести раствор в мерную колбу на 1000 мл, довести до объема водой и тщательно перемешать.

Подготовка образца. Растворите некоторое количество образца в ацетатном буферном растворе, чтобы получить раствор, содержащий в каждом мл от 9 до 22 HUT. (Такая концентрация даст значение оптической плотности в приведенной ниже процедуре в предпочтительном диапазоне от 0,2 до 0,5.)

Процедура кислотной протеазы
Внесите пипеткой по 10 мл раствора субстрата в каждую из серии пробирок размером 25 × 150 мм: по одной для каждого теста на фермент и одну для холостого образца субстрата. Пробирки нагревают на водяной бане при 40 ° около 5 мин. В каждую пробирку, кроме бланка субстрата, добавьте 2,0 мл препарата образца и начните отсчет времени реакции с момента добавления раствора; добавьте 2,0 мл ацетатного буферного раствора в пустую пробирку с субстратом. Закройте пробирки резиновыми пробками № 4 и осторожно постучите по каждой пробирке по ладони в течение 30 с, чтобы перемешать. Нагрейте каждую пробирку на водяной бане при 40 ° в течение ровно 30 мин, а затем быстро внесите пипеткой 10,0 мл раствора трихлоруксусной кислоты в каждую пробирку. Энергично встряхивайте каждую пробирку против пробки в течение примерно 40 с, а затем дайте остыть до комнатной температуры в течение 1 часа, встряхивая каждую пробирку против пробки с интервалами от 10 до 12 минут в течение этого периода. Приготовьте бланки ферментов следующим образом: нагрейте в отдельных пробирках 10,0 мл раствора субстрата и около 5 мл препарата образца на водяной бане в течение 30 минут, затем добавьте 10,0 мл раствора трихлоруксусной кислоты к раствору субстрата, хорошо встряхните. в течение 40 с, и к этой смеси добавляют 2,0 мл предварительно нагретого препарата. Снова встряхните и охладите при комнатной температуре в течение 1 часа, встряхивая с интервалами от 10 до 12 минут.
В конце 1 ч энергично встряхните каждую пробирку и профильтруйте через 11-сантиметровый ватман № 42 или аналогичный фильтровальную бумагу, повторно фильтруя первую половину фильтрата через ту же бумагу. Определите оптическую плотность каждого фильтрата в ячейке размером 1 см при 275 нм с помощью подходящего спектрофотометра, используя фильтрат из бланка субстрата, чтобы установить прибор на ноль. Исправьте каждое показание, вычтя соответствующее показание холостого опыта фермента, и запишите полученное значение как AU.
[Примечание: если скорректированное значение оптической плотности от 0,2 до 0,5 не получено, повторите тест, используя большее или меньшее количество ферментного препарата, если необходимо.]

Стандартная кривая. Перенесите 100,0 мг L-тирозина хроматографической чистоты или эквивалента (Aldrich Chemical Co.), предварительно высушенного до постоянного веса, в мерную колбу на 1000 мл. Растворить в 60 мл 0,1 н. Соляной кислоты. Когда L-тирозен полностью растворится, разбавьте раствор водой до объема и тщательно перемешайте. Этот раствор содержит 100 мкг тирозина в 1,0 мл. Приготовьте еще три разведения из этого исходного раствора, чтобы они содержали 75,0, 50,0 и 25,0 мкг тирозина на мл. Определите оптическую плотность четырех растворов при 275 нм в 1-см ячейке на подходящем спектрофотометре по сравнению с 0,006 N соляной кислотой. Подготовьте график зависимости поглощения от концентрации тирозина. Определите наклон кривой по оптической плотности на мкг тирозина. Умножьте это значение на 1,10 и запишите как AS. Должно быть получено значение приблизительно 0,0084.

Расчет кислотной протеазы
Одна единица HUT протеолитического (кислотная протеаза) активность определяется как количество фермента, которое производит за 1 мин при определенных условиях гидролизат, поглощение которого при 275 нм такое же, как у раствора, содержащего 1,10 мкг / мл тирозина в 0,006 н. соляной кислоте.
Рассчитайте HUT на грамм исходного ферментного препарата по уравнению

HUT / г = (AU / AS) × (22/30 Вт)

где 22 - конечный объем исследуемого раствора; 30 - время реакции, мин; и W - вес исходной взятой пробы, г.

[Примечание: значение AS при тщательно контролируемых и стандартизованных условиях составляет 0,0084; это значение может использоваться для рутинной работы вместо значения, полученного по стандартной кривой, но точное значение, рассчитанное по стандартной кривой, следует использовать для более точных результатов и в случаях сомнений.]

СЕРТИФИКАТ АНАЛИЗА

наименование товара	Кислотная протеаза
Другое имя	Нет данных	Страна происхождения	Китай
Штамм	Aspergillus oryzae	Дата производства	13 МАЯ 2019
Серийный номер	SP19050903	Дата окончания срока	12 МАЯ 2021 ГОДА
Пакет	25 кг / ведро	Количество	100 кг
ПРОТОКОЛ	ТЕХНИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ	ПОЛУЧЕННЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ	МЕТОД
ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ
Описание	коричневый порошок	Соответствует	Визуальный
Запах и вкус	Характерный запах и вкус	Соответствует	Вкус
Влажность	Не более 7%	5,1%	Анализатор влажности
ИДЕНТИФИКАЦИЯ
Опознаваемая активность	Положительно влияет на активность бромелайна	Соответствует	В доме
ДЕЯТЕЛЬНОСТЬ
Протеазная активность	NLT 500 000 HUT / г	508 270 HUT / г	FCC VII
МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ
Общее количество бактерий Колиформные бактерии (КОЕ / г) Плесень и дрожжи E.Coli Сальмонелла Золотистый стафилококк Синегнойная палочка	Не более 3000 КОЕ / г Не более 30 КОЕ / г Не более 100 КОЕ / г Отсутствует Отсутствует Отсутствует Отсутствует	500 КОЕ / г ＜10 КОЕ / г ＜10 КОЕ / г Не обнаружена Не обнаружена Не обнаружена Не обнаружена	FDA BAM Online Ch.3 FDA BAM Online Ch.4 FDA BAM Online Ch. 2 FDA BAM Online Ch.4 FDA BAM Online Ch.5 FDA BAM Online Ch.12 AOAC
ТЯЖЕЛЫЕ МЕТАЛЛЫ
привести Меркурий Кадмий Мышьяк	Не более 3 частей на миллион Не более 0,1 частей на миллион Не более 1 частей на миллион Не более 1 частей на миллион	0,21 частей на миллион ＜0,1 промилле ＜1 ppm ＜1ppm	USP <231> USP <231> USP <231> USP <231>
Хранение: хранить в прохладном и сухом месте, защищенном от света, держать барабан закрытым, когда он не используется. Вывод: соответствует стандартам IU. Срок годности: Срок годности Acid Protease при предписанных условиях хранения и герметичной упаковке составляет 2 года. Продукт СООТВЕТСТВУЕТ вышеуказанным спецификациям. Утверждено RICKY H. ZHU Уполномоченным лицом, подписавшим

*The above information is a direct translation of the information provided to Newgen Biotech from the manufacturer of кислотная протеаза. This Certificate of Analysis should be used for informational purposes and is not intended as a substitute for strict quality control analysis by the purchaser of this product.

Упаковка и хранение

Мешок для упаковки твердых пищевых продуктов, 25 кг / бочка.

Acid Protease следует хранить в сухих, прохладных и хорошо проветриваемых местах, вдали от солнца, тепла.

Оплата :T / T, Paypal, Western Union, Alibaba Trade Assurance, VISA, MasterCard, e-Checking, Pay Later, LC и т. Д.