Щелочная протеаза
  • Щелочная протеазаЩелочная протеаза

Щелочная протеаза

Щелочную протеазу следует хранить в сухих, прохладных и хорошо вентилируемых местах, вдали от солнца, тепла.

Отправить запрос

Описание продукции


Применение и принцип

Эта щелочная протеаза используется для определения протеазной активности, выраженной в единицах ПК, препаратов, полученных из Bacillus subtilis var. и Bacillus licheniformis var. Анализ основан на 30-минутном протеолитическом гидролизе казеина при 37 ° и pH 7,0. Негидролизованный казеин удаляют фильтрованием, а солюбилизированный казеин определяют спектрофотометрически.


Реагенты и растворы щелочной протеазы
Казеин Используйте казеин сорта Hammarsten (United States Biochemical Corp., Каталожный № 12840 или аналогичный).
Трис-буфер (pH 7,0) Растворите 12,1 г трис (гидроксиметил) аминометана ферментативной чистоты (или эквивалентного) в 800 мл воды и титруйте 1 н. Соляной кислотой до pH 7,0. Перенести в мерную колбу на 1000 мл, довести до объема водой и перемешать.
Раствор TCA Растворите 18 г трихлоруксусной кислоты и 19 г тригидрата ацетата натрия в 800 мл воды в мерной колбе на 1000 мл, добавьте 20 мл ледяной уксусной кислоты, доведите до объема водой и перемешайте.
Раствор субстрата Растворите 6,05 г трис (гидроксиметил) аминометана ферментного качества в 500 мл воды, добавьте 8 мл 1 н. Соляной кислоты и перемешайте. Растворите в этом растворе 7 г казеина и нагревайте 30 мин на кипящей водяной бане, периодически помешивая.
Охлаждают до комнатной температуры и доводят pH до 7,0 с помощью 0,2 н. Соляной кислоты, медленно добавляя кислоту при интенсивном перемешивании, чтобы предотвратить осаждение казеина. Переносят смесь в мерную колбу на 1000 мл, доводят до объема водой и перемешивают.

Подготовка образца Используя трис-буфер, приготовьте раствор препарата фермента образца так, чтобы 2 мл конечного разведения содержали от 10 до 44 единиц бактериальной протеазы.


Процедура щелочной протеазы
Пипетируйте 10,0 мл раствора субстрата в каждую из серии пробирок размером 25 × 150 мм, что позволяет использовать одну пробирку для каждого теста на фермент, одну пробирку для каждого холостого фермента и одну пробирку для холостого образца субстрата. Уравновешивают пробирки в течение 15 мин на водяной бане, поддерживаемой при 37 ° ± 0,1 °.
Включив секундомер в нулевое время, быстро внесите пипеткой 2,0 мл препарата образца в уравновешенный субстрат. Перемешайте и снова поместите пробирки в водяную баню. Добавьте 2 мл трис-буфера (вместо препарата для приготовления образца) к бланку субстрата. Ровно через 30 минут добавьте 10 мл раствора TCA в каждый инкубатор фермента и в бланк субстрата, чтобы остановить реакцию. Нагрейте пробирки на водяной бане еще 30 мин, чтобы белок полностью свернулся.
В конце второго периода нагревания энергично встряхните каждую пробирку и профильтруйте через 11-сантиметровый ватман № 42 или аналогичный фильтр, удаляя первые 3 мл фильтрата.
[Примечание: фильтрат должен быть совершенно прозрачным.]
Определите оптическую плотность фильтрата каждого образца в ячейке размером 1 см при 275 нм с помощью подходящего спектрофотометра, используя фильтрат из холостого образца субстрата, чтобы установить прибор на ноль. Исправьте каждое показание, вычтя соответствующее показание холостого опыта фермента, и запишите полученное значение как AU.

Стандартная кривая. Перенесите 100,0 мг L-тирозина хроматографической чистоты или эквивалента (Aldrich Chemical Co.), предварительно высушенного до постоянного веса, в мерную колбу на 1000 мл. Растворить в 60 мл 0,1 н. Соляной кислоты. Когда раствор полностью растворится, разбавьте раствор водой до объема и тщательно перемешайте. Этот раствор содержит 100 мкг тирозина в 1,0 мл. Приготовьте еще три разведения из этого исходного раствора, чтобы они содержали 75,0, 50,0 и 25,0 мкг тирозина на мл. Определите оптическую плотность четырех растворов при 275 нм в 1-см ячейке на подходящем спектрофотометре по сравнению с 0,006 N соляной кислотой. Подготовьте график зависимости поглощения от концентрации тирозина.


Расчет щелочной протеазы
Одна бактериальная протеазная единица (ПК) определяется как такое количество фермента, которое в условиях анализа производит эквивалент 1,5 мкг / мл L-тирозина в минуту.
По стандартной кривой и интерполяцией определите оптическую плотность раствора, имеющего концентрацию тирозина 60 мкг / мл. Должна быть получена цифра, близкая к 0,0115. Разделите интерполированное значение на 40, чтобы получить поглощение, эквивалентное поглощению раствора с концентрацией тирозина 1,5 мкг / мл, и запишите полученное таким образом значение как AS.
Рассчитайте активность образца ферментного препарата по уравнению

ПК / г = (AU / AS) × (22/30 Вт)

где 22 - конечный объем реакционной смеси в мл; 30 - время реакции, мин; и W - вес исходной взятой пробы, г.

Упаковка и хранение щелочной протеазы

Мешок для упаковки твердых пищевых продуктов, 25 кг / бочка.


Щелочную протеазу следует хранить в сухих, прохладных и хорошо вентилируемых местах, вдали от солнца, тепла.

Оплата :T / T, Paypal, Western Union, Alibaba Trade Assurance, VISA, MasterCard, e-Checking, Pay Later, LC и т. Д.

Горячие Теги: Щелочная протеаза, Производители, Поставщики, Оптом, Купить, Завод, Индивидуальные, В наличии, Навальные, Бесплатный образец, Бренды, Китай, Сделано в Китае, Дешево, Скидка, Низкая цена, Скидка на покупку, Цена, Прайс-лист, Предложение, GMP, Качество, последние продажи, два года хранения

Связанные категории

Отправить запрос

Для получения информации о наших продукций или прайс-листах, пожалуйста, оставьте нам Ваш адрес электронной почты, и мы будем связываться с вами в течение 24 часов.