Бета-глюкан

Применение и принцип

Применение и принцип This procedure is used to determine Beta glucan activity of enzyme preparations derived from Aspergillus niger var. and Bacillus subtilis var. The assay is based on a 15-min hydrolysis of lichenin substrate at 40°and at pH 6.5. The increase in reducing power due to liberated reducing groups is measured by the neocuproine method.

Реагенты и растворы
Фосфатный буфер Растворите 13,6 г одноосновного фосфата калия примерно в 1900 мл воды, добавьте 70% раствор гидроксида натрия до pH 6,5 ± 0,05, затем перенесите раствор в мерную колбу на 2000 мл, доведите до объема водой и перемешайте. .
Раствор неокупроина A Растворите 40,0 г безводного карбоната натрия, 16,0 г глицина и 450 мг пентагидрата сульфата меди примерно в 600 мл воды. Перенести раствор в мерную колбу на 1000 мл, довести до объема водой и перемешать.
Раствор неокупроина B Растворите 600 мг гидрохлорида некупроина примерно в 400 мл воды, перенесите раствор в мерную колбу на 500 мл, доведите до объема водой и перемешайте. Отменить при появлении желтого цвета.
Субстрат лихенина Измельчите 150 мг лихенина (Sigma Chemical Co., Каталожный № L-6133 или эквивалент) до тонкого порошка в ступке и растворите его примерно в 50 мл воды при температуре примерно 85 °. После завершения растворения (от 20 до 30 минут) добавляют 90 мг боргидрида натрия и продолжают нагревание ниже точки кипения в течение 1 часа. Добавьте 15 г Amberlite MB-3 или эквивалентной ионообменной смолы и непрерывно перемешивайте в течение 30 минут. Отфильтруйте с помощью вакуума через фильтровальную бумагу Whatman № 1 или эквивалентную в воронке Бюхнера и промойте бумагу примерно 20 мл воды. Добавьте к фильтрату 680 мг одноосновного фосфата калия и повторно отфильтруйте его через фильтрующую прокладку Millipore 0,22 мкм или аналогичную. Промойте подушку 10 мл воды и доведите pH фильтрата до 6,5 ± 0,05 с помощью 1 н. Гидроксида натрия или 1 н. Соляной кислоты. Перенесите фильтрат в мерную колбу на 100 мл, доведите до объема водой и перемешайте. Хранить при температуре от 2 ° до 4 ° не более 3 дней.
Стандартный раствор глюкозы Растворите 36,0 мг безводной декстрозы в фосфатном буфере в мерной колбе на 1000 мл, доведите до объема водой и перемешайте.
Подготовка к тесту Приготовьте раствор из образца препарата фермента так, чтобы 1 мл окончательного разведения содержал от 0,01 до 0,02 единиц бета-глюкана. Взвешивают образец, переносят его в мерную колбу подходящего размера, доводят до нужного объема фосфатным буфером и перемешивают.

Процедура
Пипетируйте по 2 мл субстрата лихенина в каждую из четырех отдельных пробирок с градуировкой 25 мл и нагрейте пробирки на водяной бане при 40 ° в течение 10–15 минут для уравновешивания.
После уравновешивания добавьте 1 мл фосфатного буфера в пробирку 1 (бланк субстрата), 1 мл стандартного раствора глюкозы в пробирку 2 (стандарт глюкозы), 4 мл раствора неокупроина A и 1 мл препарата для тестирования в пробирку 3 (бланк фермента. ) и 1 мл препарата для испытания в пробирку 4 (образец). Подготовьте пятую пробирку для пустого буфера и добавьте 3 мл фосфатного буфера.
Инкубируйте пять пробирок при 40 ° ровно 15 минут, а затем добавьте 4 мл раствора неокупроина A в пробирки 1, 2, 4 и 5. Добавьте 4 мл раствора неокупроина B во все пять пробирок и накройте каждую подходящим размер стеклянный мрамор.
[ВНИМАНИЕ: Не используйте резиновые пробки. ]
Нагрейте пробирки на сильно кипящей водяной бане ровно 12 минут до появления цвета, затем охладите до комнатной температуры в холодной воде и доведите объем каждой до 25 мл водой. Закройте пробирки пленкой Parafilm или другим подходящим укупорочным средством и перемешайте, перевернув несколько раз.
Определите оптическую плотность каждого раствора при 450 нм в 1-см ячейках с помощью подходящего спектрофотометра по сравнению с холостым буфером в пробирке 5.

Расчет
Одна единица бета-глюкана (BGU) определяется как количество фермента, которое будет высвобождать редуцирующий сахар (в эквиваленте глюкозы) со скоростью 1 мкмоль / мин в условиях анализа.
Рассчитайте активность взятого на анализ ферментного препарата следующим образом:
BGU = [(A4 A3) × 36 × 106] / [(A2 A1) × 180 × 15 × мкг образца]

где A4 - оптическая плотность образца (пробирка 4), A3 - оптическая плотность бланка фермента (пробирка 3), A2 - оптическая плотность стандарта глюкозы (пробирка 2), A1 - оптическая плотность бланка субстрата (пробирка 1), 36 - микрограммы глюкозы в стандартном растворе глюкозы, 106 - коэффициент, переводящий микрограммы в граммы, 180 - вес 1 мкмоль глюкозы и 15 - время реакции в минутах.

СЕРТИФИКАТ АНАЛИЗА

* Приведенная выше информация является прямым переводом информации, предоставленной Newgen Biotech от производителя этого продукта. Этот Сертификат анализа следует использовать в информационных целях и не предназначен для замены строгого анализа контроля качества покупателем этого продукта.

Упаковка и хранение

Мешок для упаковки твердых пищевых продуктов, 25 кг / бочка.

Хранить в сухом, прохладном и хорошо вентилируемом месте вдали от солнца, тепла.

Оплата :T / T, Paypal, Western Union, Alibaba Trade Assurance, VISA, MasterCard, e-Checking, Pay Later, LC и т. Д.